Q. BCA assay 농도 계산에서 오류ㅠㅠ
알 hagendase (대학생)  |  2019.12.05 22:05

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방정식 y=1.0653x+0.0146

R^2=0.9886

 

sample의 양을 모르는 tube7과 8은 세포추출물 2㎕를 cell lysis buffer로 1/4 희석한 후에,

희석된 sample 2㎕ + D.W. 23㎕ 를 넣어서 duplicate로 진행하였습니다.

그리고 이들을 BCA working solution200 ㎕와 반응 시켜주었습니다.

 

위에 엑셀로 농도를 구해봤는데요.. 아무래도 농도를 잘못 구한 것 같은데

어디서 오류가 생겼는지를 모르겠어서 도움을 요청드립니다ㅠㅠ!

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A. 답변 (5)
SPEED  |  2019.12.05 22:21

세포 추출물 2ul에 lysis buffer를 얼마 넣었나요?

 

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hagendase  |  2019.12.05 22:37
6 ㎕ 넣었어요!
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SPEED  |  2019.12.05 22:52

시료원액 2ul + lysis buffer 6ul

희석된 2ul안에 시료가 0.5ul가 들어있습니다.

시료 7, 8의 OD값을 y=1.0653x+0.0146에 대입하여나온 ug * 2를 하면 시료 ug에

대한 단백질 양이 나옵니다.

시료 7 OD = 0.1617

y=1.0653x+0.0146에 대입하면 y=0.18685901ug/0.5ul *2 = 0.37371802ug/ul

시료 7 OD = 0.1505

y=1.0653x+0.0146에 대입하면 y=0.17492765ug/0.5ul *2 = 0.3498553ug/ul

그런데 BSA standard curve의 X축이 BSA 농도 0~10ug과 다르네요.

 

 

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hagendase  |  2019.12.05 23:23
감사합니다!
y 값이 OD 니까 방정식의 y에 시료 OD값인 0.1617을 대입하는 것 아닌가요?
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SPEED  |  2019.12.05 23:33

네.. Y가 OD네요..

시료원액 2ul + lysis buffer 6ul

희석된 2ul안에 시료가 0.5ul가 들어있습니다.

시료 7, 8의 OD값을 y=1.0653x+0.0146에 대입하여나온 ug * 2를 하면 시료 ug에

대한 단백질 양이 나옵니다.

시료 7 OD = 0.1617

y=1.0653x+0.0146에 대입하면 X=0.137188ug/0.5ul *2 = 0.274376ug/ul

시료 7 OD = 0.1505

y=1.0653x+0.0146에 대입하면 X=0.126675ug/0.5ul *2 = 0.25335ug/ul

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