Q. 배지 Western시 basal 확인 어떻게 하는지좀;;;
배지맨  |  2009.06.22 13:35

현재 세포에서 배지로 방출되는 단백질을 western해야 합니다.

근데 생각해보니 세포 자체를 lysis해서 western하는 경우에는

b-actin같은 것들을 basal protein으로 사용하여서 정량로딩이 되었는지를

확인하면 되는데 배지로 배출되는 것들은 어떻게 해야 하는지 모르겟네요;;;

basal level확인 없이도 괜찮은건지.. 아니면 다른 방법이 있는건지...

물론 로딩 전에 정량을 해서 제가 정량 로딩은 자신할수 있습니다만은...

리뷰어들이 그걸 믿으려면 데이터가 필요하니까요.


nothern을 하면될것 같은데 nothern은 해본적도 없고 저희 실험실이나 주변 실험실엔

nothren하는 랩도 없고요;;;

어떻게 방법좀 알려주십시오!!!

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A. 답변 (1)
하늘을달려라  |  2009.06.22 17:28

생각보다 많은 protein들이 분비가 됩니당.

같은 젤을 두장을 내려서 한장은 웨스턴 하시고

다른 젤 하나는 쿠마시 스테이닝하여 정량이 로딩되었다는것을 보여주세용...

지금까지 여러번 올라온 질문이였는데 특별한 해답이 없었던것 같습니다..


그리고 northern blot으로 보여준다는것은...조금 다른이야기인것같은데...

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