Q. western blot wet transfer이 안됩니다
알 asefpjv (대학생)  |  2020.12.03 19:25

말그대로 갑자기 transfer가 되질 않습니다.

다시 만들어야 될 데이터가 생겨서 블랏팅을 진행하고 있는데 이전에 만들어 두었던 프로토콜 그대로 하고 있습니다.

그런데 트랜스퍼 과정에서 전혀 트랜스퍼가 되질 않습니다. 

멤브레인에 남는 단백질이 전혀 없다고 해야 될까요...

마커가 조금 남긴 하는데 모두 번지고 다른 라인에 붙어있고 그럽니다.

전류나 전압 변화도 해보고, 버퍼 조성도 이것저것 해봤는데 계속 똑같이 transfer가 안되네요

젤에서 단백질이 나오기는 하는것 같은데 멤브레인에 붙지를 못하는건지... pvdf membrane이 그런경우가 있을까요? 새로산 biorad pvdf membrane이긴 한데 이전이랑 같은 제품이라 그것도 아닌것 같고, dot blot 해보면 잘되기도 하고...

검색해서 나오는 troubleshooting에서 이것저것 시도해봤는데 잘 안됩니다. 혹시 사소하게 생각하지 못하는 문제점을 발견했던분 있을까요

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A. 답변 (5)
ㅇㅇ  |  2020.12.03 19:36

정말 기본적인거긴 하지만, 양극 음극을 반대로 꽂으셨을 가능성은 없나요? 저랬을 때 멤브레인에 마커 정말 쪼금말고는 남는게 없었거든요

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아무고토몰라요  |  2020.12.04 15:35

transfer kit 문제일 수도 있을거 같아요. 저도 예전에 transfer가 안돼서 이것저것 해보다가 transfer kit를 바꿔봤는데 됐었습니다.

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asefpjv  |  2020.12.04 17:55

정상작동 확인했습니다..

기존에 사용하던 transfer 버퍼랑 새로산 버퍼랑 조성이 좀 달랐나 봅니다. 

이름이 같은 tris glycine transfer buffer라 동일조건으로 돌리면 되는건줄 알았는데 기존에 400mA (200~100V) 로 돌리던걸 20V 까지 내려서 돌려야 되더라구요 아무튼 답변주신분들 감사합니다.

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bio  |  2020.12.08 10:21
채택답변

invitrogen에서 나온 거와 bio-rad에서 나온거 running 조건이 다릅니다. 

가끔 이거 확인 하지 않는 분 계시더라구요

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asefpjv  |  2020.12.24 20:35

ㄴ 제조사까지 정확하게 ㄷㄷ 

맞습니다 bio rad 에서 thermo 거로 바꿨는데 다르더라구요..

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