Q. DPPH 실험시 Vit C 농도에 따른 흡광도 값이 이상합니다
알 호안미로 (대학생)  |  10.27 12:44
안녕하세요, DPPH 실험을 하고있는 실험초보입니다.

블랭크는 1.1~1.3사이로 잡아서 실험을 진행했고 96웰 플레이트에서 dpph 용액 180ul + sample 20ul를 암실에 30분 반응시켜 결과를 확인하였습니다.

실험결과는 컨트롤인 비타민과 동일 농도로 흡광도를 찍은 샘플들은 농도가 낮아지면서 흡광도값이 증가하는 양상을 보여 농도의존적인 항산화능을 확인했는데요.

근데 문제는 비타민입니다..ㅠㅠ 컨트롤로 사용하는 비타민씨를 샘플들과 가찬가지로 5mg/ml, 3mg/ml 농도로 만들어서 각각 1/2씩 3번 희석하여 흡광도를 보았는데..
고농도(5, 3)에서 저농도 웰보다 흡광도값이 높게 나옵니다..(항산화활성이 더 떨어짐) 파이펫팅에도 신경써서 재실험 해봐도 결과가 비슷한 양상으로 나옵니다..
그런데 각각 3번 희석하여 가장 낮은 농도인 0.625ug/ml 과 0.375ug/ml 농도에서는 흡광도값이 가장 높게 나왔고(아닌 것도 있었지만 대체로) 다른 웰과 대조해보면 육안으로도 dpph용액의 푸른색깔을 살짝 띠고있기도 합니다.
이처럼 최저농도외 다른 농도에서는 흡광도값이 농도와 비례하여 높았습니다..(농도가 높을수록 흡광도값은 낮아져야함)

이와 별개로 비타민 농도를 300ug/ml로 시작하여 1/2씩 희석하거나 3mg/ml을 1/10씩 희석하여 흡광도를 봤을 때는 농도가 낮아지면서 흡광도값도 올라가는걸 확인했습니다.
이 결과만 보면 비타민의 문제는 아닌것 같고..
왜 농도가 높아지면 흡광도값이 저렇게 나오는지 모르겠습니다..
어떤 논문에서는 20mg/ml에서 1/2씩 희석해서 보던데.. 물론 블랭크값이 좀 더 높긴 했지만요..

브릭에도 비슷한 사례를 볼 수 있었는데 적절한 답변을 찾지는 못해서 글을 써봅니다..
컨트롤인 비타민과 다른 샘플들이 동일농도에서 보여주는 항산화능을 보고싶은데 이럴경우 샘플농도를 낮춰서 다시 흡광도를 찍어야 하나요.. 샘플이 많아 비타민만 농도를 바꿔 보고있는데 어렵네요 ㅠㅠ

이 문제에 대해 조언을 좀 구해볼 수 있을까요...?
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