Q. transfection 후 western blotting하는데 해당 단백이 아닌 다른 단백도 같이 나와요
알 문제가많아요 (대학원생)  |  10.26 18:44

RAW24.7cell에 DNA를 lipofection 방법으로 transfection합니다.

사용하는 reagent는 Fugene6이구요

Hsp90-flag gene과 IKKr-myc gene을 cotransfection하는데 샘플 중 Hsp90만 들어간 샘플과 IKKr만 들어간 샘플, 둘 다 들어간 샘플 등등이 있습니다.

각각의 샘플을 western blotting으로 확인하는데요 Hsp90 antibody를 붙였을 때 Hsp90뿐 아니라 모든 샘플에서 band가 detech 됩니다. ㅠㅠ

Ikkr antibody 역시 IKKr transfectioned lysate가 아닌 모든 lysate에서 band가 detech되구요..

원래는 detech되면 안되는 부분 아닌가요..? detech 될 수도 있나요?

해당 gene transfection이 이루어지지 않았는데도 wb시 detech될 수 있는건가요?

일단은 tag gene antibody로 다시 해보려합니다. ㅠㅠ

 

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A. 답변 (3)
SPEED  |  10.26 19:12

해당단백질이 아닌 다른 단백질도 같이 나온다는 뜻이 target과 같은 위치에서

target이 없는 시료도 band가 나온다는 뜻인가요?

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문제가많아요  |  10.27 11:12

네ㅠㅠ HSPsp90만을 transfection 시킨 lysate에서는 hsp90 band가 뜨고 Hsp90 gene이 들어가지 않은 lysate에서는 hsp90 band가 뜨질 않아야하는데 모든 lysate에서 target band가 뜹니다ㅠㅠ 크기가 너무 비슷한 위치에 붙어서 그런가싶어 tag antibody로 다시 해보려고 하는데 도대체 왜 band가 자꾸 뜨는지 모르겠어요

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SPEED  |  10.27 11:47

아무것도 넣지 않은 cell에서도 동일 위치, 동일 dnesity로 band가 나온다면

tag으로 검출해 봐야겠네요.

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