Q. HUVEC angiogenesis 실험 질문드립니다.
개구리 시은 (대학원생)  |  10.26 16:30

안녕하세요 최근 Angiogenesis실험을 진행하고있는 석사생입니다.

 

실험을 진행하면서 진행이 잘 안되는 부분들이 있어 질문드리게 되었습니다.

 

현재 키우고 있는 HUVEC은 invitrogen에서 구입하였고 배양은 Lonza EGM-2를 사용하여 배양하고 있습니다.

 

실험하고자 하는건 기본적은 Angiogenesis 실험인 Transwell migration, Scratch wound, Tube formation등입니다.

1. HUVEC

HUVEC을 키우면서 느껴진게 HDF등과 달리 serum 등이 없으면 24시간 후쯤 부터 상태가 안좋아 지면서 후루룩 떨어져 나가더라고요

정상적인 상태인가요..?

Starvation을 basal medium+ 0.5%FBS 시키고 물질처리를 basal media(EBM)로 했더니 엉망진찬이었습니다. 이후에 starvation후 물질을 EBM-2에 처리하였더니 정상적으로 붙어있었습니다.

제가 Angiogenesis를 보고자 하는 물질이 크리티컬하게 Angiogenesis를 향상시켜주는 물질은 아닌거 같은데 물질처리를 EGM에 해야 하는지... Starvation조건을 어떻게 해줄지 고민입니다...

 

일단 다양한 논문 내에서는 RPMI1640, M199, EGM-2 등을 사용하는걸 보았습니다. 

혹시 브릭 회원분들 중에 어떤배지를 사용하였고 어떻게 배양하였는지 말씀해 주실수 있을까요?

 

 

2. Trasnwell

현재 가장 문제인데, 세포 seed하고 나서 upper는 기본배지, lower은 기본배지 + 처리하고자 하는 물질을 넣고 24h 배양 후 Staining진행하고 있는데

세포가 membrane에 붙어있지 않고 떨어져 나갑니다. 그래서 최근에는 Gelatin coating도 진행해 보았는데 큰 해결은 하지 못했습니다.

현재 사용하고는 plate는 corning의 8um짜리를 사용하고 있는데 이게 너무 커서 그런지 아니면 배지 문제인지 잘 모르겠습니다. 최근에는 gelating coating후 upper와 lower모두 EGM-2에 seed, 배양하였는데도 불구하고 떨어졌습니다. 

다른 논문에서는 8um, 3um 0.4um pore size가 다양하던데 size가 적당할까요..?

 

 

 

너무 기본적인 질문드려 죄송합니다.

고수님들의 답변기다리겠습니다.

항상감사합니다

 

주소복사
첫 답변을 달아주세요.
<본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, BRIC에서 추가적인 검증과정을 거친 정보가 아님을 밝혀드립니다.>
프리미엄 할인행사
HOME   |   이용약관   |   개인정보처리방침
© BRIC