Q. 농약 배지를 만들어야 합니다!
알 zzzzd (일반인)  |  2017.11.29 10:33
 

PDA 배지에 농약을 섞어 농약배지를 만들어야 하는데
희석배수 1000배로 만들어야 하고, PDA배지는 300ml 만들 예정입니다.
그리고 가지고 있는 농약이 액상수화제입니다.
300ml 만들 거면 그곳에 0.3ml를 넣어야 하는 것을 알겠는데, 농약 자체를 그냥 멸균한 배지에 넣어도 괜찮나요? 오염되지 않나요?


그리고 두번째 배지는 마찬가지로  PDA배지는 300ml 만들 예정이고, 희석배수 3000입니다. 제형은 입상수화제입니다.
300ml 만들 거면 그곳에 0.1g를 넣어야 하는것 같은데, 농약 자체를 그냥 멸균한 배지에 넣어 녹인 후 분주해도 될까요? 아니면 증류수나 멸균수에 녹인 후 농도를 맞춰서 넣어야 할까요?

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1. 농약 자체를 (액상/입상) 그냥 멸균한 PDA배지에 넣어도 되는가?
2. 만약 증류수(또는 멸균수)에 섞은 후 PDA배지에 넣어야 한다면 농도를 어떻게 맞추는가(그 계산식이 무엇인가)?
3. 세균이 발생하지 않게 하기 위해서는 스트랩토마이신이라는 것을 넣는다는데 이 스트랩토마이신을 300ppm으로 만드는데 200ml만 만들거면, 0.06g을 증류수 200ml에 넣어 만드는 것이 맞나요?(틀리면 계산 식좀..)

부탁드리겠습니다...

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A. 답변 (1)
느림보  |  2017.11.29 15:58
채택답변
 
넣는 양은 계산을 잘 했어요.
오토클레이브 해야 하는 거면, 해당 농약의 유효성분이 열 안정성이 어느정도인지 확인해야 합니다.
열에 안정한 성분이라면 미리 넣어도 되는데, 불안정한 성분이라면 오토클레이브 후에 온도가 적당히 내려왔을 때 멸균처리한 고농도 시약(흔히 100배~1000배 농도로 녹인 후, 여과 멸균합니다)을 넣게 됩니다.

고농도 stock을 만들 때 큰 문제가 있는데, 농약은 일반 시약과 달리 보통 증량제나 제형을 위한 고형성분이 많이 들어갑니다. 그럴경우 여과가 안되니까 우선 적은 양의 50% 정도 에탄올이나 DMSO에 우선 녹인 후에, 멸균증류수를 부피로 맞추면 됩니다. 

스트렙토마이신은 열안정성이 약하므로, 50-100mg/ml 정도 농도로 증류수에 녹이고, 여과멸균한 후, 냉동보관하시고, 배지에 첨가할 때는 오토클레이브 후에 온도가 60도 이하까지 내려온 후에 넣어야 합니다.

시그마 사이트를 잘 뒤져보면 참고할 만한 내용이 많습니다. 
https://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/plant-biotechnology/tissue-culture-protocols.html
https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/antibiotics.html

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<본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, BRIC에서 추가적인 검증과정을 거친 정보가 아님을 밝혀드립니다.>
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