Q. 세포배지 및 세포오염
세포배지  |  2016.05.27 14:57
MCF 7 세포를 culture 하고 있습니다.

ATCC는 배지조성이 DMEM + 10%FBS + 0.01mg/ml insulin 이렇게 되어 있는데

한국세포주은행은 RPMI + 10%FBS 로 되어있는데........

insulin이 문제인데 넣고 안넣고 어떤차이가 있는지???;;;

참고로 세포는 ATCC 세포주은행 다 구입했거든요........

그리고 셀 상태가 오염이 된 것 같은데요. 잘 자라지도 않구요.

사진 상태가 2주동안 키운거예요. 계대는 하지 않고 너무 더디게 크는 것 같기도 하고

셀 상태도 좋지 않은 것 같구요. 무슨 문제인지....

조언 부탁드립니다....

사진은 DMEM + 10FBS 배지로 키웠다가 3일째부터 인슐린 첨가 한거 입니다.
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A. 답변 (3)
Daegu*  |  2016.05.27 19:49

일단 media 자체는 ATCC는 배지조성
(DMEM + 10%FBS + 0.01mg/ml insulin 이렇게 되어 있는데
한국세포주은행은 RPMI + 10%FBS 로 되어있는데)
두가지 모두 키우는데는 문제 될 것이 없구요, insulin은 없어도 자라는데 문제가 없습니다.

그리고 오염된 것 같지는 않구요, MCF-7의 경우 세포의 density가 너무 낮으면 자라지 못하고
죽는데요, 처음 세포를 받아서 stock을 풀때 너무 큰 size의 dish에다가 세포를 푼 것 같습니다.
원래 MCF-7자체가 성장이 느리긴 합니다만.. 2주정도라면 충분히 계대 하고도 남을 시간입니다.

결론은 stock을 푸실 때 세포의 density 를 잘못 seeding 하여 세포가 죽은 것으로 판단 됩니다.

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세포배지  |  2016.05.30 09:12
저는 처음 100파이 디쉬에 thawing 하였는데,,,,,

이렇게 죽어서 다시 구입해서 할려고 하는데,,,,

어떻게 해야하나요?ㅜㅜ
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Daegu*  |  2016.05.31 20:29

세포를 seeding density가 ATCC에서 추천하는게 있을 겁니다. 그 거에 맞추시거나,, 저는
경험상 세포를 thawing 하고 난 후 spin down을 하고, pellet양을 보고 어떤 size의 dish에 풀 것인지를 결정합니다. 만일 pellet양이 아주 적다면,,, 그만큼 작은 size의 dish에 세포를 풀어 줍니다.

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